Laporan Praktikum Biokimia
LAPORAN PRAKTIKUM
BIOKIMIA
dibuat untuk memenuhi
tugas praktikum
Modul Cellular and
Molecular Basis of Inheritance
Oleh:
Kelompok 9
M. Ilyas Saputera
Azwar Lauzardi
Ilham Murtala
Noor Shabrina
Reni Dwi Parihat
Mulia Sari
Annisafitria
Eka Rahma
Abqariyatuzzahra
M.
Novia Putri R.
Program Studi Pendidikan Dokter
Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
2012
Kata Pengantar
Segala puji dan syukur kami ucapkan
kehadirat Allah Yang Maha Esa, yang telah memberikan rahmat dan karunia-Nya
serta nikmat yang tiada hentinya kepada manusia. Terutama nikmat iman dan akal
yang menjadikan manusia sebagai makhluk yang paling sempurna. Dengan nikmat
akal tersebutlah kita dituntut untuk dapat memanfaatkannya dengan
sebaik-baiknya tanpa menyimpang dari perintah-Nya.
Salawat serta salam bagi makhluk mulia
junjungan kita baginda Nabi Muhammad SAW, yang telah mengajarkan ilmu dari
Allah kepada umat-umatnya. Ilmu tersebut tidak akan habis sekalipun air laut
dijadikan tinta untuk menuliskan ilmunya itu. Dan manusia hanya diberi sedikit
sekali.
Alhamdulillah, kami dapat menyelesaikan laporan praktikum pemisahan protein dengan
berbagai cara ini.. Semoga dengan
tersusunnya makalah ini dapat menambah pengetahuan kita. ”Tiada gading yang tak
retak” demikian pepatah mengatakan. Karena itu tiada menutup kemungkinan jika
dalam penulisan makalah ini terdapat banyak kesalahan dan kekurangan. Untuk
itu, segala kritik dan saran kami harapkan demi kesempurnaan makalah ini. Terima Kasih.
Ciputat,
5 Nopember 2012
Kelompok 9
Daftar Isi
Kata
Pengantar...................................................................................................................... ii
Daftar
Isi................................................................................................................................ iii
1
Pengendapan Protein Dengan Garam Kosentrasi Tinggi
1.1 Tujuan ............................................................................................................... 1
1.2 Dasar Teori........................................................................................................ 1
1.3 Alat dan Bahan.................................................................................................. 1
1.4 Cara kerja........................................................................................................... 2
1.5 Hasil Percobaan................................................................................................. 2
1.6 Kesimpulan........................................................................................................ 4
2
Pengendapan
protein dengan etanol absolut
2.1 Tujuan ............................................................................................................... 4
2.2 Dasar Teori........................................................................................................ 4
2.3 Alat dan Bahan.................................................................................................. 4
2.4 Cara kerja........................................................................................................... 4
2.5 Hasil Percobaan................................................................................................. 4
2.6 Kesimpulan........................................................................................................ 5
3
Pengendapan
protein dengan logam berat
3.1 Tujuan ............................................................................................................... 5
3.2 Dasar Teori........................................................................................................ 5
3.3 Alat dan Bahan.................................................................................................. 6
3.4 Cara kerja........................................................................................................... 7
3.5 Hasil Percobaan................................................................................................. 7
3.6 Pembahsan......................................................................................................... 8
3.7 Kesimpulan........................................................................................................ 11
4
Pengendapan
protein dengan Pelarut Alkaloid
4.1 Tujuan ............................................................................................................... 11
4.2 Dasar Teori........................................................................................................ 12
4.3 Alat dan Bahan.................................................................................................. 12
4.4 Cara kerja........................................................................................................... 12
4.5 Hasil Percobaan................................................................................................. 12
4.6 Kesimpulan........................................................................................................ 12
5
.
Kromatografi
5.1 Tujuan ............................................................................................................... 12
5.2 Dasar Teori........................................................................................................ 13
5.3 Alat dan Bahan.................................................................................................. 13
5.4 Cara kerja........................................................................................................... 14
5.5 Hasil Percobaan................................................................................................. 14
5.6 Pembahasan....................................................................................................... 16
5.7 Kesimpulan........................................................................................................ 16
Daftar Pustaka....................................................................................................................... 17
1.1 Tujuan
Dengan percobaan ini dapat diketahui bahwa protein dapat dipisahkan dengan menggunakan larutan garam konsentrasi tinggi.
1.2 Dasar Teori
Protein berasal dari kata Yunani yaitu Proteios yang berarti "pertama". Protein merupakan makromolekul yang mempunyai gugus karboksil dan gugus amina dan terbentuk dalam ikatan peptida(1). Protein mempunyai sifat mudah larut dalam air, karena mengandung gugus karboksil dan amina yang terdalam ikatan peptidanya(2). Garam dengan konsentrasi tinggi akan dapat menarik air yang terdapat dalam protein tersebut,karena garam juga dapat menetralkan muatan listrik sehingga menyebabkan daya larut protein terhadap air berkurang dan protein mengendap. Sedangkan dari percobaan ini, dapat diketahui bahwa semakin tinggi konsentrasi garam tersebut, semakin tinggi kemampuannya untuk mengurangi daya larut protein tersebut
1.3 Alat Dan Bahan
Adapun alat dan bahan yang digunakan dalam percobaan ini yaitu sebagai berikut :
a. Alat :
" Tabung reaksi
" Pipet tetes
" Corong
" Kertas saring
" Batang pengaduk
b. Bahan :
" Serum
" Larutan Amonium sulfat kristal
" Larutan Amonium sulfat 50%
" Pereaksi Biuret(NaOH 10% dan CuSO4 1%)
1.4 Cara Kerja
Adapun cara kerja yang dilakukan pada percobaan ini yaitu sebagai berikut :
1. Menyiapkan serum dimulai dengan pengambilan darah, kemudian dilakukan sentrifugasi selama 5 menit
2. Siapkan dua tabung reaksi yang kering dan bersih
3. Didapatkan serum, kemudian masukkan ke dalam dua tabung reaksi yang berbeda masing-masing 2,2 ml serum.
4. Tambahkan amonium sulfat 50% sama banyak dengan serum yang ada yaitu masing-masing 2,2 ml ke dalam dua tabung reaksi tersebut.
5. Aduk tabung pertama dan kemudian saring dengan kertas saring
6. Ambil endapan yang tersisa di kertas saring
7. Lakukan uji biuret dengan cara mencampur endapan tersebut dengan aquades 1 ml, NaOH 1 ml, dan 10 tetes CuSO4
8. Lakukan uji biuret pada filtratnya juga, dengan cara mencampur filtrat dengan aquades 1 ml, NaOH 1 ml, dan 10 tetes CuSO4
9. Ambil tabung kedua yang telah berisi campuran serum dan amonium sulfat
10. Kemudian tambahkan amonium sulfat kristal sampai jenuh, terdapat endapan atau amonium sulfat yang ditambahkan tidak bisa larut lagi.
11. Saring dengan kertas saring, kemudian lakukan uji biuret pada endapan yang ada di kertas saring dan filtratnya
12. Amati perubahan yang terjadi pada endapan dan filtrat tabung pertama dan kedua
1.5 Hasil Percobaan
SAMPEL ENDAPAN (1) FILTRAT (1) ENDAPAN (2) FILTRAT (2)
HASIL UJI BIURET Biru Keunguan
(+) Biru
(-) Ungu
(+) Biru
(-)
PROTEIN TERDETEKSI Terdeteksi Tidak Terdeteksi Terdeteksi Tidak Terdeteksi
Gambar: hasil uji biuret endapan protein dan filtratnyadengan campuran amonium
sulfat 50%
Gambar : hasil uji biuret endapan protein dan filtratnyadengan campuran amonium
sulfat kristal
1.6 Kesimpulan
Dari hasil percobaan di atas, maka dapat disimpulkan Amonium sulfat kristal yang memiliki kosentrasi lebih tinggi dapat mengendapkan atau mendeteksi protein lebih banyak dibandingkan amonium sulfat 50%.
2. Pengendapan protein dengan etanol absolut
2.1 Tujuan Praktikum
Mengetahui teori dasar etanol absolut dapat mengendapkan protein
2.2 Dasar Teori
Protein akan mengendap bila diberi etanol absolut, dengan cara menarik air dalam larutan protein
2.3 Alat dan Bahan
- Sampel : Albumin
- Etanol Absolut
- Kertas saring
- Corong
- Tabung reaksi
- Mikropipet
- Pereaksi biuret
2.4 Cara Kerja
1. Buat campuran larutan dari albumin (2ml) dan etanol absolut (2ml)
2. Saring campuran dengan kertas saring, lalu pisahkan antara endapan dengan filtratnya dalam tabung reaksi yang berbeda.
3. Kemudian tambahkan aquades pada masing-masing tabung.
4. Siapkan pereaksi biuret, yaitu campuran dari CuSO4 (10 tetes) dan NaOH (1ml). Campuran ini menghasilkan larutan yang berwarna biru.
5. Campurkan endapan dengan biuret, lalu lihat hasilnya.
6. Campurkan filtrat dengan biuret, lalu lihat hasilnya.
7. Setelah melalukan kedua hal tersebut, jika ditemukan perubahan warna biru menjadi ungu, maka menunjukan adanya protein.
2.5 Hasil Pengamatan`
Hasil Saringan Albumin Endapan Filtrat
Hasil Uji Biuret (+)
Berubah menjadi ungu (-)
Tidak berubah, tetap berwarna biru
Campuran-campuran tersebut akan menghasilkan warna ungu pada endapan protein, dan apabila didiamkan beberapa saat akan kembali menjadi warna biru. Namun setelah dikocok kembali akan menghasilkan warna ungu kembali.
2.6 Kesimpulan
Endapan dari pencampuran etanol absolut dan albumin menunjukan adanya kandungan protein didalamnya, namun filtrat dari campuran tersebut tidak mengadung protein. Hal ini menunjukan bahwa etanol absolut dapat menyaring protein dengan cara mengendapkannya.
3. Pengendapan protein dengan logam berat.
3.1 Tujuan Praktikum
Mengetahui bahwa logam berat dapat mengendapkan protein secara denaturasi irreversible.
3.2 Dasar Teori
Protein adalah suatu biomolekul besar yang terdapat disetiap organisme,memiliki berbagai jenis dan fungsi biologis yang berbeda-beda. Protein merupakansuatu zat makanan yang sangat penting bagi tubuh karena zat ini berfungsi sebagaisumber energi dalam tubuh serta sebagai zat pembangun dn pengatur. Protein adalahpolimer dari asam amino yang dihubungkan dengan ikatan peptida.
Ditinjau dari strukturnya protein terbagi menjadi dua yaitu:
" Protein filber yang merupakan protein berbentuk molekul panjang seperti serat. Sifat umum dari protein ini adalah sukar larut pada air dan sukar diuraikan dengan enzim.
Diantara protein yang termasuk golongan protein ini adalah kolagen,kreatin dan protein sutera alam.
" Protein globuler umumnya berbentuk bulat atau elips dan terdiri atas rantai polipeptida yang berlipat.Protein globular pada umunya mempunyai sifat dapat larut dalam air, dalamlarutan asam atau basa dan dalam etanol. Beberapa jenis protein globular yaitualbumin, globulin, histon dan protamin.
Sifat sifat protein
1. Ionisasi
Protein yang larut dalam air akan membentuk ion yang mempunyai muatanpositif dan negatif. Dalam suasana asam molekul protein akan membentuk ion positif,sedangkan dalam suasana basa akan membentuk ion negatif.
2. Denaturasi
Denaturasi protein dapat diartikan suatu perubahan atau modifikasi terhadapstruktur sekunder, tersier dan kuartener molekul protein tanpa terjadinya pemecahanikatan-ikatan kovalen. Karena itu denaturasi dapat diartikan suatu proses terpecahnya ikatan hidrogen, interaksi hidrofobik, ikatan garam dan terbukanya lipatan atau wirumolekul protein.
3. Viskositas
Viskositas adalah tahanan yang timbul oleh adanya gesekan antara molekul-molekul di dalam zat cair yang mengalir. Suatu larutan protein dalam air mempunyaiviskositas atau kekentalan yang relative lebih besar daripada viskositas air sebagai pelarutnya
4. Kristalisasi
Pada dasarnya semua usaha yang dilakukan itu dimaksudkanuntuk menurunkan kelarutan protein dan ternyata pada titik isoelektriknya kelarutanprotein paling kecil, sehingga mudah dapat dikristalkan dengan baik.
3.3 Alat dan Bahan
" Alat
a. 8 buah tabung reaksi
b. 1 rak tabung reaksi
c. Corong
d. Pipet tetes
e. Pipet mikrometer
f. Kertas saring
g. spatula
" Bahan
1. Albumin telur
2. Susu
3. HgCl2
4. Pb-asetat
5. NaOH 10 %
6. CuSO41%
7. Aquades
3.4 Cara kerja
1. Siapkan semple pada pipet makro meter untuk susu dan albumin telur(A dan B) masing masing sebanyak 1ml.
2. Tambahkan HgCl2 pada tabung A, sebanyak 10 tetes menggunakan pipet tetes
3. Selanjutnya saring dengan menggunakan corong dan kertas saring.
4. Lakukan uji Biuret pada filtrat dan endapan susu dan albumin telur yaitu dengan menambahkan NaOH sebanyak 1 ml menggunakan pipet tetes dan selanjutnya 1-10 tetes CuSO4menggunakan pipet tetes yang lainnya.
5. Amati perubahan warna yang terjadi pada tabung reaksi tersebut dan catat.
6. Lakukan langkah ke-3 sampai ke-5 pada tabung B namun menggunakan Pb-asetat.
3.5 Hasil Percobaan
1.6.1 Tabel
Hasil Saringan
Endapan albumin
Filtrat albumin
Endapan susu
Filtrat susu
Hasil HgCl2
Tidak ada endapan
Bening keunguan
(+)
Ungu
(+)
Kebiruan
(-)
Hasil Pb-asetat
Tidak ada endapan
Bening keunguan
(+)
Ungu
(+)
Bening keburuan
(-)
3.6 Pembahasan
1. Pada endapan albumin, tidak diperoleh endapan setelah ditetesi dengan HgCl2 dan Pb-asetat, sehingga tidak dapat dilakukan ujibiuret dengan benar.
2. Pada filtrat albumin diperoleh warna ungu setelah penambahan 10 tetes CuSO4. Hal ini menunjukkan bahwa filtrat albumin yang diuji masih mengandung protein.
3. Pada endapan susu, diperoleh warna ungu setelah ditambahkan dengan 6 tetes CuSO4. Hal ini menunjukkan bahwa endapan susu mengandung protein.
4. Pada filtrat susu, diperoleh warna ungu setelah ditambahkan dengan 6 tetes CuSO4. Hal ini menunjukkan bahwa filtrat susu mengandung protein.
3.7 Kesimpulan
Berdasarkan percobaan yang kami lakukan pada sempel albumin tidak adanya endapan, dan pada filtratnya terkandung unsur protein berdasarkan terbuktinya perubahan warna yang terjadi pada larutan pada tetesan yang ke-10. Sedangkan pada sampel susu yang kami uji kami mendapatkan endapan yang membuktikan bahwasannya didalam susu terdapat protein dengan berubahnya warna pada tetesan ke-6, sedangakan pada filtrat susu tidak mengandung protein karena perubahan warna yang terjadi pada filtrat susu adalah biru (kebiruan dan bening kebiruan).
Menurut dasar teori pada sempel albumin yang seharusnya terjadi adalah endapannya mengandung protein dan perubahan warna yang terjadi adalah ungu dan pada filtratnya tidak akan terjadi perubahan warna karena tidak adanya protein yang terkandung. Jadi pada percobaan yang dilakukan terjadi kegagalan dalam penyaringan protein pada albumin yang telah dicampur dengan logam berat (HgCl2 dan Pb-asetat).
4. Pengendapan protein dengan Pelarut Alkaloid
4.1 Tujuan Praktikum
untuk mengetahui proses pengendapan protein dengan pereaksi alkaloid
4.2 Dasar Teori
Pereaksi alkaloid merupakan asam organik yang dapat mengendapkan alkaloid dan protein, karena adanya nitrogen trivalen pada alkaloid dan protein. TCA berfungsi untuk deproteinisasi (penyingkiran protein) darah dan asam sulfosalisilat digunakan untuk melacak ada tidaknya protein dalam urin.
4.3 Alat dan Bahan
ﾢ 4.3.1 Alat
" tabung reaksi
" Pipet tetes
" mikro pipet
" rak tabung
ﾢ Bahan
" sampel (albumin 1%, serum dan urin)
" Pelarut alkaloid : TCA (trikloroasetat) dan Asam sulfosalisilat.
4.4 Cara kerja
Sediakan 1 ml sampel Albumin/ serum tambahkan 10 tetes TCA, hasil (+) menunjukkan adanya presipitat. Sediakan 1 ml sampel albumin/urin tambahkan asam sulfosalisilat, hasil (+) menunjukkan adanya presipitat.
4.5 Hasil
Pelarut Alkaloid Albumin Serum Urin
TCA + + ---
Asam sulfosalisilat + --- -
4.6 Kesimpulan
Berdasarkan percobaan yang telah kami lakukan, dapat disimpulkan bahwa pada albumin terkandung protein setelah ditambahkan TCA dan asam sulfosalisilat karena menunjukkan adanya
5. Kromatografi
5.1 Tujuan Praktikum
Memisahkan molekul (protein/hemoglobin dan vitamin B12 dengan teknik penyaringan molekuler berdasarkan ukuran molekul.
5.2 Landasan Teori
Kromatografi adalah salah satu dari sekelompok teknik beragam yang digunakan untuk memisahkan campuran berbagai zat berdasarkan perbedaan afinitas relatif zat tersebut untuk dua media yang berbeda, yaitu yang satu (fase bergerak) cairan bergerak dan yang lain (fase stasioner atau penyerap) zat padat berpori atau gel atau cairan cairyang tersalut pada penyangga padat. Kecepatan setiap zat yang terbawa oleh fase bergerak bergantun g pada kelarutannya (dalam fase bergerak yang cair) atau tekanan uap (dalam fase bergerak yang gas) dan afinitasnya terhadap penyerap.
Hemoglobin adalah pigmen merah pembawa oksigen pada eritrosit, dibentuk oleh eritrosit yang berkembang dalam susmsum tulang. Merupakan hemoprotein yang mengandung empat gugus hem dam globin serta mempunyai kemampuan oksigenasi reversibel. Satu molekul hemogubin mengandung emapt rantai polipeptida globin, terbentuk dari antara 141 sampai 146 asam amino. Berat molekul protein dalam hemoglobin sekitar 65000 dalton.
Vitamin B12 (cynocobalanin) adalah vitamin hematopoeitik yang larut dalam air yang terdapat dalam daging dan produk-produk hewan. Untuk dapat diadsorbsi oleh usu, vitamin ini harus bercampur dengan faktor instrinsik, dan metabolismenya dihubungkan dengan metabolisme asam folat. Vitamin ini diperlukan untuk pertumbuhan dan reflikasi semua sel tubuh dan fungsi sistem saraf, diperlukan untuk sintesi purin dan pirimidin (dan juga DNA, protein, dan nukleoprotein), reaksi metilasi, hematopoiesis, dan sintesis meilin. Berat molekul vitamin B12 sekitar 1350 dalton.
Vitamin B12 memiliki berat molekul yang lebih kecil dari hemoglobin, sehingga molekul vitamin B12 akan masuk ke dalam pori-pori butiran, ke;luar lagi, terperangkap dalam butiran yang lain, demikian seterusnya, sehingga molekul vitamin B12 akan lebih lama melewati kolom. Sedangkan hemoglobin memiliki berat molekul yang lebih besar sehingga tidak dapat masuk dalam pori-pori butiran, akan tetapi langsung keluar melalui celah-celah diantara butiran kolom. Dengan demikian hemoglobin akan lebih cepat keluar dari kolom, dibandingkan dengan Vitaman B12
5.3 Alat dan Bahan
" Alat
1. Kolom berisi gel penyaring molekuler (Sephadex-G100)
2. Spektrofotometer 540 nm
3. 23 buah tabung reaksi
4. 2 rak tabung reaksi
5. Pipet mikrometer
" Bahan
1. Hemoglobin
2. Vitamin B 12
3. Dapar NaCl 0,1 M
5.4 Cara Kerja
1. Tambahkan 3 tetes campuran Vitamin B12 dan Hemoglobin pada kolom kromatografi
2. Buka tutup bawah kolom
3. Berikan dapar NaCl 0,9 % secara terus-menerus agar gel tetap basah dan cepat mengalir
4. Tampung 5 tetesan dari kolom pada sutu tabung
5. Pindahkan ke tabung yang lainnya hingga mencapai 5 tetes, dan lakukan hal tersebut sampai kolom jernih atau bening kembali
6. Amati warna pada setiap tabung penampungan
7. Tentukan intensitas warna yang ada (-/+/++/+++)
8. Tambahkan 3 ml akuades pada setiap tabung
9. Masukkan tabung tersebut ke spektrofotometer satu-persatu
10. Baca serapan warna yang ditunjukkan oleh spektrometer
5.5 Hasil Percobaan
Tabel hasil percobaan
Tabung Warna Intensitas Serapan
1. Bening - -0,005
2. Bening - 0,004
3. Merah Tua +++ 0,196
4. Merah Tua ++ 0,194
5. Merah Tua + 0,168
6. Merah +++ 0,116
7. Merah Muda +++ 0,077
8. Merah Muda +++ 0,054
9. Merah Muda +++ 0,040
10. Merah Muda ++ 0,038
11. Merah Muda ++ 0,035
12. Merah Muda +++ 0,037
13. Merah Muda ++ 0,028
14. Merah Muda ++ 0,025
15. Merah Muda ++ 0,025
16. Merah Muda ++ 0,022
17. Merah Muda + 0,017
18. Merah Muda + 0,017
19. Merah Muda + 0,017
20. Merah Muda + 0,014
21. Merah Muda + 0,007
22. Merah Muda + 0,007
23. Bening - 0,007
Diagram hasil percobaan dengan spertrofotometer
5.6 Pembahasan
Tetesan pada tabung pertama dan kedua setelah dimasukkan 3 tetes campuran hemoglobin dan vitamin B12 disertai larutan NaCl dalam kolom berisi gel penyaring molekuler masih berwarna bening, hal ini terjadi karena larutan campuran tersebut belum bisa melewati kolom.
Pada tetesan ketiga muncul warna merah tua dengan intensitas tinggi, dan seterusnya warna tersebut semakin memudar. Warna tersebut kembali naik pada tabung ke-12, selanjutnya warna kembali memudar pada setiap tabung. Hingga akhirnya kolom dan tetesan berwarna bening saat tetesan berada pada tabung ke-23.
Dari hasil pemeriksaan tetesan yang telah diberi 3 ml akuades dengan menggunakan spektrofotometer dengan panjang gelombang 450 nm, didapatkan bahwa serapan tertinggi terdapat pada tabung ke-3 (0,196 A), nilai ini merupakan nilai puncak dari hemoglobin. Serapan warna pada tabung selanjutnya semakin menurun. Dan pada tabung ke-12 serapan meningkat pada nilai 0,037 A, nilai ini merupakan nilai puncak bagi serapan vitamin B12. Nilai serapan semakin menurun, hingga akhirnya pada tabung ke-23 nilai serapannya adalah 0,007 A.
5.7 Kesimpulan
Dapat disimpulkan bahwa teknik kromatografi dapat memisahkan protein/hemoglobin dengan vitamin B12, karena hemoglobin dan vitamin B12 memiliki berat molekul yang berbeda, sehingga hemogloboin yang memiliki berat molekul yang lebih besar lebih cepat keluar dari kolom dibandingkan dengan vitamin B12 yang memiliki berat molekul yang lebih kecil, dan harus melewati pori-pori butiran terlebih dahulu sebelum keluar dari kolom. Dan dapat disimpulkan bahwa serapan warna puncak dari hemoglobin adalah 0,196 A dan serapan warna puncak dari vitamin B12 adalah 0,037 A.
DAFTAR PUSTAKA
W.A. Newman Dorland. Kamus Kedokteran Dorland.-ed 31-. Jakarta: EGC; 2010.
Devi A, Endah W, at all. Buku Panduan Praktikum Modul Celluler & Molecular Basis of
Inheritance Semester I. Jakarta: PSPD FKIK UIN Syarif Hidayatullah Jakarta. 2012.
Asam amino dan protein.(cited 5/11/2012). Diakses dari:
http://staff.uny.ac.id/sites/default/files/Protein-kuliah%20ko2.pdf.
Nita fitrianti. Pengendapan dengan logam. (Cited 03/10/2012). Diunduh dari: (http://www.scribd.com/doc/52390109/pengendapan-dg-logam)
Tidak ada komentar: